Les principaux personnages de l'opéra sont représentés par un leitmotiv* :
Madame Butterfly (Cio-Cio-San) : soprano*
Leitmotiv : ici au violon solo
Pinkerton, lieutenant de la marine des Etats-Unis : ténor*
Leitmotiv : sujet de la fugue *
Sharpless, consul des Etats-Unis à Nagasaki : baryton
Suzuki, servante de Cio-Cio-San : mezzo-soprano
Goro, l'entremetteur : ténor
Yamadori, riche prince japonais : ténor
Le Bonze, oncle de Cio-Cio-San : basse
Kate, épouse américaine de Pinkerton : mezzo-soprano
Yakusidé, oncle ivrogne de Cio-Cio-San : basse
le Commissaire impérial : basse
l'Officier d'état civil : basse
la Mère de Cio-Cio-San : mezzo-soprano
la Tante de Cio-Cio-San : soprano
la Cousine de Cio-Cio-San : soprano
Douleur, l'enfant de Butterfly et Pinkerton : rôle muet